产品货号：
BTN100908B
中文名称：
一站式长效期SDS-PAGE套装B(2-30KD)
英文名称：
One-Stop Stable SDS-PAGE Pack(B)
产品规格：
30次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)套装基础上改良而得，主要改良的地方有两处：一是配胶液的pH偏酸，二是将还原剂加入到电泳液中。
产品特点：
1．偏酸的pH使PAGE胶比常规SDS-PAGE 更加稳定，便于配预制胶，增加实验的可重复性。
2．能降低蛋白质的脱氨反应和烷基化反应，也能阻止蛋白质的二硫键再生成。
3．把还原剂整合到电泳液中，避免了蛋白质在电泳过程中重新形成二硫键，蛋白条带比常规SDS-PAGE 更加锐利。
4．可把分离胶和浓缩胶配胶液整合成一个，成分更简单。
5．更换电泳液即可用于不同大小的蛋白(A型电泳液适合20 kD以上蛋白，B型适合2-50 kD蛋白)，分离多肽时不需要Tricine-SDS-PAGE。
6．即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
7．安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。
8．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
产品组成：
储存条件：常温运输和保存(SDS-PAGE上样液需-20℃保存)，有效期一年。
使用方法：
一、使用本产品不需要浓缩胶，直接配制分离胶。如果使用A型电泳液(分离30 KD以上蛋白质用)，最好配制10%的PAGE胶；如果使用B型电泳液(分离2-30 KD的蛋白质用)，最好配制12%的PAGE胶。也可以选择其他胶浓度，但各成分用量需要按比例调整。
1．第一次使用本产品时需先配制30%丙烯酰胺溶液:在本产品提供的装有60克丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水，充分摇晃直到溶解即得200mL 30%丙烯酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2．第一次使用本产品时还需配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19:1)溶液(简称30% AB溶液,下同): 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙烯酰胺。对长效期SDS-PAGE电泳，丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺比例一般在19:1，因为此时PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。制备方法是将3g甲叉双丙烯酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙烯酰胺溶液中，摇晃溶解即得30%的AB溶液，该溶液最好4℃避光(可包上锡箔纸壁光)保存并在一个月内用完。30% AB溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
3．新鲜配制10%的APS(过硫酸铵)：按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL 去离子水的比例将去离子水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP 管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
4．本产品不需要配制分离胶和浓缩胶两种胶，只需要配一种连续胶。配制方法如下(以下是以配制10mL的胶的用量为例，用户自己需要根据胶的大小决定所需体积)：
5．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙烯酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和30μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。
7．在胶的液面达到顶部的时候停止灌胶并插入梳子，室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
8．拔出梳子，用水冲洗加样孔。
9．配制的PAGE胶可以在4℃长期放置数月，直到使用。注意：需要盖上1×长效期SDS-PAGE 配胶液，否则PAGE胶会变干而无法使用。
10．使用时，将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够量的1×长效期SDS-PAGE电泳液(A型或B型)。
注意：长效期SDS-PAGE电泳液A型或B型均以干粉形式提供，足够配20 L 1×电泳液。配制时需将全部干粉(含多种没有充分混合的成分，必须一次性全部使用)溶解在去离子水中，并定容到1 L，得到20×长效期SDS-PAGE电泳液，使用时再用去离子水稀释成1×电泳液。20×长效期SDS-PAGE电泳液不需要调pH，可以室温放置。
11．在上槽中加入适量的1×长效期SDS-PAGE电泳液和1/200 体积(以电泳液体积为基数)的长效期SDS-PAGE还原剂并用玻璃棒搅拌混合均匀。
12．在蛋白质样品中加入5×长效期SDS-PAGE上样液(8μL样品加2μL上样液)，72℃加热10分钟。注意：上样液中的一些成分在低温保存时会沉淀，所以用前需要65℃保温10分钟左右使沉淀溶解，混匀后才能使用。上样液中的2-巯基乙醇容易挥发，使用多次后用户可以在10μl样品(蛋白质样品+上样液的混合液)中补加0.5μl自备的2-巯基乙醇原液，以便使蛋白质充分变性。如果样品是蛋白质沉淀(如TCA沉淀得到的蛋白质)，则需要用Tris缓冲液将其pH调到中性(可用pH试纸检测)，否则残留溶剂可能会改变上样液的pH，严重影响电泳效果。
13．短暂离心，取上清液上样。上样的蛋白总量跟检测方法相关，如果用银染，可以只上样ng级别(对每条带的蛋白量而言)，如果用考染，需要上样μg级别(对每条带的蛋白量而言)。
14．用150V恒压电压进行电泳，直到染料进入胶底部(在B型电泳液中，溴酚蓝的速度相当于3-5 KD的蛋白质)。注意：在长效期SDS-PAGE中的电泳速度要快于普通SDS-PAGE。在B型电泳液中的速度又快于A型电泳液。过程中，电流会降低，属于正常现象。
15．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或转膜)。注意：Western转膜需要专门的转膜液(百奥莱博可以提供)。
二、如果需要更高分辨率，也可把上法配制的胶当成分离胶，并在其上再叠加4%的浓缩胶，操作如下：
16．按上面方法配制分离胶，只是倒胶后在胶面距离顶部1.5cm的时候，或者距梳子齿0.5cm时，停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm 厚的水，使胶顶部液面平整。室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)后，用1×长效期SDS-PAGE 配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。
17．配制4%浓缩胶(参考上节第4-6 步)。倒胶后在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
18．拔出梳子，用1×电泳液(A型或B型)冲洗加样孔，后续处理接第7步。
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产品特点：
1．偏酸的pH使PAGE胶比常规SDS-PAGE 更加稳定，便于配预制胶，增加实验的可重复性。
2．能降低蛋白质的脱氨反应和烷基化反应，也能阻止蛋白质的二硫键再生成。
3．把还原剂整合到电泳液中，避免了蛋白质在电泳过程中重新形成二硫键，蛋白条带比常规SDS-PAGE 更加锐利。
4．可把分离胶和浓缩胶配胶液整合成一个，成分更简单。
5．更换电泳液即可用于不同大小的蛋白(A型电泳液适合20 kD以上蛋白，B型适合2-50 kD蛋白)，分离多肽时不需要Tricine-SDS-PAGE。
6．即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
7．安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。
8．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
产品组成：
| 成分 | 30T(A) | 30T(B) |
| 丙烯酰胺(干粉) | 60g | 60g |
| 甲叉双丙烯酰胺(干粉) | 3g | 3g |
| 长效期SDS-PAGE 配胶液，4× | 200ml | 200ml |
| 长效期SDS-PAGE还原剂 | 10ml | 10ml |
| TEMED | 1.5ml | 1.5ml |
| 过硫酸铵 | 1g | 1g |
| 长效SDS-PAGE上样液，5× | 1ml | 1ml |
| 长效期SDS-PAGE电泳液A型 | 20L | - |
| 长效期SDS-PAGE电泳液B型 | - | 20L |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
储存条件：常温运输和保存(SDS-PAGE上样液需-20℃保存)，有效期一年。
使用方法：
一、使用本产品不需要浓缩胶，直接配制分离胶。如果使用A型电泳液(分离30 KD以上蛋白质用)，最好配制10%的PAGE胶；如果使用B型电泳液(分离2-30 KD的蛋白质用)，最好配制12%的PAGE胶。也可以选择其他胶浓度，但各成分用量需要按比例调整。
1．第一次使用本产品时需先配制30%丙烯酰胺溶液:在本产品提供的装有60克丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水，充分摇晃直到溶解即得200mL 30%丙烯酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2．第一次使用本产品时还需配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19:1)溶液(简称30% AB溶液,下同): 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙烯酰胺。对长效期SDS-PAGE电泳，丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺比例一般在19:1，因为此时PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。制备方法是将3g甲叉双丙烯酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙烯酰胺溶液中，摇晃溶解即得30%的AB溶液，该溶液最好4℃避光(可包上锡箔纸壁光)保存并在一个月内用完。30% AB溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。
3．新鲜配制10%的APS(过硫酸铵)：按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL 去离子水的比例将去离子水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP 管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
4．本产品不需要配制分离胶和浓缩胶两种胶，只需要配一种连续胶。配制方法如下(以下是以配制10mL的胶的用量为例，用户自己需要根据胶的大小决定所需体积)：
| 胶浓度 | 用量(mL) | 总体积 (mL) | ||
| 去离子水 | 30% AB溶液 | 4×长效期SDS-PAGE配胶液 | ||
| 10%(对A型) | 4.20 | 3.30 | 2.50 | 10 |
| 12%(对B型) | 3.50 | 4.00 | 2.50 | 10 |
5．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙烯酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和30μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。
7．在胶的液面达到顶部的时候停止灌胶并插入梳子，室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
8．拔出梳子，用水冲洗加样孔。
9．配制的PAGE胶可以在4℃长期放置数月，直到使用。注意：需要盖上1×长效期SDS-PAGE 配胶液，否则PAGE胶会变干而无法使用。
10．使用时，将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够量的1×长效期SDS-PAGE电泳液(A型或B型)。
注意：长效期SDS-PAGE电泳液A型或B型均以干粉形式提供，足够配20 L 1×电泳液。配制时需将全部干粉(含多种没有充分混合的成分，必须一次性全部使用)溶解在去离子水中，并定容到1 L，得到20×长效期SDS-PAGE电泳液，使用时再用去离子水稀释成1×电泳液。20×长效期SDS-PAGE电泳液不需要调pH，可以室温放置。
11．在上槽中加入适量的1×长效期SDS-PAGE电泳液和1/200 体积(以电泳液体积为基数)的长效期SDS-PAGE还原剂并用玻璃棒搅拌混合均匀。
12．在蛋白质样品中加入5×长效期SDS-PAGE上样液(8μL样品加2μL上样液)，72℃加热10分钟。注意：上样液中的一些成分在低温保存时会沉淀，所以用前需要65℃保温10分钟左右使沉淀溶解，混匀后才能使用。上样液中的2-巯基乙醇容易挥发，使用多次后用户可以在10μl样品(蛋白质样品+上样液的混合液)中补加0.5μl自备的2-巯基乙醇原液，以便使蛋白质充分变性。如果样品是蛋白质沉淀(如TCA沉淀得到的蛋白质)，则需要用Tris缓冲液将其pH调到中性(可用pH试纸检测)，否则残留溶剂可能会改变上样液的pH，严重影响电泳效果。
13．短暂离心，取上清液上样。上样的蛋白总量跟检测方法相关，如果用银染，可以只上样ng级别(对每条带的蛋白量而言)，如果用考染，需要上样μg级别(对每条带的蛋白量而言)。
14．用150V恒压电压进行电泳，直到染料进入胶底部(在B型电泳液中，溴酚蓝的速度相当于3-5 KD的蛋白质)。注意：在长效期SDS-PAGE中的电泳速度要快于普通SDS-PAGE。在B型电泳液中的速度又快于A型电泳液。过程中，电流会降低，属于正常现象。
15．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或转膜)。注意：Western转膜需要专门的转膜液(百奥莱博可以提供)。
二、如果需要更高分辨率，也可把上法配制的胶当成分离胶，并在其上再叠加4%的浓缩胶，操作如下：
16．按上面方法配制分离胶，只是倒胶后在胶面距离顶部1.5cm的时候，或者距梳子齿0.5cm时，停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm 厚的水，使胶顶部液面平整。室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)后，用1×长效期SDS-PAGE 配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。
17．配制4%浓缩胶(参考上节第4-6 步)。倒胶后在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
18．拔出梳子，用1×电泳液(A型或B型)冲洗加样孔，后续处理接第7步。
相关搜索：一站式长效期SDS-PAGE套装B(2-30KD)，One-Stop Stable SDS-PAGE Pack(B)